Laboratórios de Enzimologia e Química de Proteínas

Conhecimentos de Base Recomendados

Quimica, Bioquímica de Proteínas, Ácidos Nucleicos e Lípidos.

Métodos de Ensino

A disciplina consiste em oito módulos introdutórios de aulas teorico-práticas e aulas práticas laboratorias e num projecto a desenvolver intensivamente em quatro semanas. Para os módulos introdutórios o aluno dispõe de uma informação sumária do tema, da tecnologia a utilizar e 2 a 3 palavras chave para utilizar numa pesquisa na internet que terá de ser realizada antes da aula. O projecto consiste na elaboração e execução autónoma de um protocolo para a purificação de uma enzima sorteada de uma lista préviamente apresentada. São realizadas pelo aluno duas apresentações e dicussões, uma com a proposta do protocolo e outra no final após a execusão do mesmo.

Resultados de Aprendizagem

O objectivo central desta unidade curricular é a aquisição de conhecimentos técnicos e práticos sobre a extracção, purificação e caracterização de enzimas.

Pretende-se que o aluno adquira conhecimentos fundamentais da diversidade de atividades enzimáticas, e na caracterização físico-química de biomoléculas.

Pretende-se de igual modo que o aluno:

-aplique os conhecimentos adquiridos no desenho e avaliação de processos de purificação de proteínas e na caracterização da actividade enzimática.

-desenvolva competências de organização, planificação, autonomia e racíocinio crítico no laboratório

-desenvolva competências no processamento, análise apresentação e discussão de dados experimentais.

Estágio(s)

Não

Programa

1. Pesquisa de atividade enzimática em extractos crus. Desenho de ensaios enzimáticos

2. Exploração das propriedades físico-químicas das biomoléculas no processo de separação:

2.1Cromatografia de Exclusão Molecular: Príncipios e aplicações

2.2.Cromatografia de Troca iónica: Príncipios e aplicações

2.3 Cromatografia de Afinidade. Príncipios: afinidade, pseudo-afinidade

2.4 Cromatografia de interacção hidrofóbica. Príncipios e aplicações

2.4.FPLC e HPLC. Aplicações

2.5 Electroforese nativa e electroforese na preesença de substâncias dissociantes.Electroforese bidimensional. Aplicações

2.6 Electrotransferência, imunodetecção e imunoprecipitação. Príncipios e aplicações

3. Detecção e análise de modificações químicas em proteínas

4. Caracterização da atividade enzimática .Determinação de parametros cinéticos . Activação e Inibição

5. Desenho e execução de protocolos de purificação de enzimas. Avaliação da eficiência e custos do protocolo de purificação

Docente(s) responsável(eis)

Paula Cristina Veríssimo Pires

Métodos de Avaliação

Avaliação
Projecto: 50.0%
Exame: 50.0%

Bibliografia

R.K. Scopes, Protein Purification: Principles and practice, 3^rd ed., Springer-Verlag, New York.

Base de dados de enzimas.* :BRENDA

http://www.brenda-enzymes.info/

*consulta directa para servidores associados a establecimentos do ensino superior

Base de Dados de proteases: MEROPS

http://merops.sanger.ac.uk/

Base de dados de estrutura molecular de proteinas: PDB Protein Data Bank

http://www.rcsb.org/pdb/home/home.do