Laboratórios de Enzimologia e Química de Proteínas

Conhecimentos de Base Recomendados

Quimica, Bioquímica I

Métodos de Ensino

A disciplina consiste em oito módulos introdutórios de aulas teorico-práticas e aulas práticas laboratorias e num projecto desenvolvido intensivamente em quatro semanas. Nos módulos introdutórios o aluno dispõe de informação sumária do tema, da tecnologia a utilizar e palavras chave para utilizar numa pesquisa a realizar antes da aula. O projecto consiste na elaboração e execução autónoma de um protocolo para a purificação de uma enzima sorteada de uma lista conhecida. O aluno realiza duas apresentações e discussões, uma com a proposta do protocolo e outra no final após a execução do mesmo.

Resultados de Aprendizagem

O objectivo central desta unidade curricular é a aquisição de conhecimentos técnicos e práticos sobre a extracção, purificação e caracterização de enzimas.

Pretende-se que o aluno adquira conhecimentos fundamentais da diversidade de actividades enzimáticas, e na caracterização físico-química de biomoléculas.

Pretende-se de igual modo que o aluno:

- aplique os conhecimentos adquiridos no desenho e avaliação de processos de purificação de proteínas e na caracterização da actividade enzimática.

- desenvolva competências  de organização, planificação, autonomia e racíocinio crítico no laboratório

- desenvola competências no processamento, análise apresentação e discussão de dados experimentais.

Estágio(s)

Não

Programa

1. Pesquisa de actividade enzimática em extractos crus. Desenho de ensaios enzimáticos

2. Exploração das propriedades físico-químicas das biomoléculas no processo de separação:

2.1. Cromatografia de Exclusão Molecular: Príncipios e aplicações

2.2. Cromatografia de Troca iónica: Príncipios e aplicações

2.3. Cromatografia de Afinidade. Príncipios: afinidade, pseudo-afinidade .

2.4. Cromatografia de interacção hidrofóbica. Príncipios e aplicações

2.4. FPLC e HPLC. Aplicações.

2.5. Electroforese nativa e electroforese na preesença de substâncias dissociantes.Electroforese bidimensional. Aplicações

2.6. Electrotransferência, imunodetecção e imunoprecipitação. Príncipios e aplicações

3. Detecção e análise de modificações químicas em proteínas.

4. Caracterização da actividade enzimática .Determinação de parametros cinéticos . Activação e Inibição

5. Desenho e execução de protocolos de purificação de enzimas. Avaliação da eficiência e custos do protocolo de purificação

Docente(s) responsável(eis)

Paula Cristina Veríssimo Pires

Métodos de Avaliação

Avaliação
Apresentação e discussão do protocolo: 25.0%
Exame: 25.0%
Projecto: 25.0%
Relatório do projecto realizado: 25.0%

Bibliografia

Protein Purification: Principles and practice, 3d. edition, Springer-Verlag, New York.

 

Base de dados de enzimas.* :BRENDA

http://www.brenda-enzymes.info/

*consulta directa para servidores associados a establecimentos do ensino superior

 

Base de Dados de proteases: MEROPS

http://merops.sanger.ac.uk/

 

Base de dados de estrutura molecular de proteinas: PDB Protein Data Bank

http://www.rcsb.org/pdb/home/home.do