Laboratórios de Enzimologia e Química de Proteínas

Conhecimentos de Base Recomendados

Química Geral, Bioquímica I, Espectroscopia Biomolecular (frequência simultânea).

Métodos de Ensino

A disciplina consiste em sete módulos introdutórios de aulas teórico-práticas e aulas práticas laboratoriais e num projecto a desenvolver intensivamente em duas semanas. Para os módulos introdutórios o aluno dispõe de uma informação sumária do tema, da tecnologia a utilizar e 2 a 3 palavras - chave para utilizar numa pesquisa na internet que terá de ser realizada antes da aula. O projecto consiste na elaboração e execução autónoma de um protocolo para a purificação de uma enzima sorteada de uma lista previamente apresentada. São realizadas pelo aluno duas apresentações e discussões, uma com a proposta do protocolo e outra no final após a elaboração do mesmo.

Resultados de Aprendizagem

O objectivo central desta unidade curricular é a aquisição de conhecimentos técnicos e práticos sobre a extracção, purificação e caracterização de enzimas.

Pretende-se que o aluno adquira conhecimentos fundamentais da diversidade de actividades enzimáticas, e na caracterização físico-química de biomoléculas.

Pretende-se de igual modo que o aluno aplique os conhecimentos adquiridos no desenho e avaliação de processos de purificação de proteínas e na caracterização da actividade enzimática.

Estágio(s)

Não

Programa

1. Pesquisa de actividade enzimática em extractos crus vegetais ou animais
1.1 Desenho de ensaios enzimáticos para várias classes de enzimas.
2. Exploração das propriedades físico-químicas das biomoléculas no processo de separação 2.1Cromatografia de Exclusão Molecular: Príncipios e aplicações
2.1.2Aplicação á dessalificação, comparação com a diálise
2.1.3Localização de proteínas num processo cromatográfico
2.2.Cromatografia de Troca iónica
2.2.1Príncipios.Trocadores aniónicos e catiónicos
2.2.2 Aplicação: p. ex Purificação parcial da Lisozima.
2.2.3Localização de enzimas num processo cromatográfico.
2.3 Cromatografia de Afinidade
2.3.1Príncipios: afinidade, pseudo-afinidade
2.3.2 Aplicação: p. ex Purificação parcial de LDH por cromatografia de pseudo-afinidade
2.4 Cromatografia de interacção hidrofóbica.
2.4.1Príncipios e aplicações
2.4.2.FPLC e HPLC.
2.4.3.Utilização do HPLC na separação e análise de aminoácidos e na sequenciação de péptidos e proteínas.
2.5 Electroforese.
2.5.1Electroforese nativa e electroforese na presença de substâncias dissociantes.
2.5.2Electroforese bidimensional
2.5.3Aplicações
2.6 Electrotransferência, imunodetecção e imunoprecipitação.
2.6.1Príncipios e aplicações
3. Caracterização da actividade enzimática
3.1Determinação de parâmetros cinéticos
3.2 Activação e Inibição
4. Desenho e execução de protocolos de purificação de enzimas
4.1 Desenho de ensaios enzimáticos
4.2 Avaliação da eficiência e custos do protocolo de purificação

Docente(s) responsável(eis)

Paula Cristina Veríssimo Pires

Métodos de Avaliação

Contínua
Trabalho laboratorial ou de campo: 25.0%
Projecto: 25.0%
Apresentação e discussão de resultados experimentais : 25.0%
Exame: 25.0%

Bibliografia

SCOPS, Robert (1994). Protein Purifiction: principles and practice. 3 rd ed. New York: Springer - Verlag.