Laboratórios de Fisiologia e Biofísica Celular

Conhecimentos de Base Recomendados

Frequência prévia das seguintes Unidades Curriculares: Laboratórios de Bioquímica I, Laboratórios de Bioquímica II, Laboratórios de Bioquímica III, Fisiologia Geral, Elementos de Física, Complementos de Física, Tratamento Estatístico de Dados, Bioquímica II. Bons conhecimentos de lingua inglesa escrita, dado que toda a bibliografia, desde os livros de texto aos artigos científicos necessários para a preparação dos trabalhos, é fornecida em lingua inglesa.

Métodos de Ensino

Protocolos sucintos com bibliografia são fornecidos para preparação prévia. Os alunos trabalham em grupos, autonomamente mas sob supervisão. No início da aula é feita uma abordagem à técnica e cada grupo discute a estratégia experimental preparada.

Durante as aulas os alunos são chamados a interpretar os resultados, de forma a corrigir trajectórias e evitar artefactos, sendo ajustados os procedimentos laboratoriais. No final da aula são discutidos os métodos de análise, que será feita fora do tempo lectivo. Os alunos apresentam e discutem os resultados e as análises efectuadas em aulas TP.

Resultados de Aprendizagem

Aprendizagem de técnicas laboratoriais fundamentais para o estudo da fisiologia e biofísica das células.

Aprendizagem de estratégias experimentais para interferir com a função celular, designadamente ao nível de consumo ou produção de O2, potencial de membrana, permeabilidades membranares, sistemas de segundos mensageiros e secreção exocitótica. A prossecução destas estratégias é essencial para que o aluno clarifique conceitos teóricos essenciais de biofísica e fisiologia celular.

Pretende-se ainda que o aluno:

1) desenvolva capacidades de planificação, organização e raciocínio crítico no laboratório, com vista à resolução de problemas e à adaptação a novas situações;

2) desenvolva competências de trabalho em grupo e preocupação com a qualidade e a ética na experimentação;

3) desenvolva capacidades de processamento, análise crítica e apresentação de dados experimentais.

Estágio(s)

Não

Programa

Isolamento de células animais e fraccionamento subcelular de tecidos vegetais com quantificação e determinação de viabilidade, utilizando técnicas de dissecção, homogeneização, centrifugação diferencial, contagem de células e quantificação de proteína (fotometria).

Bioenergética mitocondrial e cloroplastidial por medição do consumo ou produção de O2 com recurso a eléctrodos de Clark, e determinações do potencial transmembranar.

Estudos da homeostasia do pH intracelular (pHi) por monitorização contínua do pHi, utilizando indicadores fluorescentes.

Regulação do potencial de membrana (p.m.) por monitorização contínua do p.m., utilizando eléctrodos selectivos a tetrafenilfosfónio.

Estudos de neurosecreção por monitorização contínua de correntes amperométricas, utilizando eléctrodos de carbono vítreo.

Calibração e processamento dos dados. Análise crítica das respostas celulares e integração com a fisiologia das células em estudo.

Apresentação oral, discussão e avaliação pelos pares.

Docente(s) responsável(eis)

Rosa Maria Moreira Alves dos Santos

Métodos de Avaliação

Avaliação
Apresentações orais: 20.0%
Trabalho laboratorial ou de campo: 30.0%
Exame: 50.0%

Bibliografia

- Subcellular Fractionation: A Pratical Approach. Graham J, Rickwood D. eds. Oxford University Press, 1st ed, 1997.

- Preparative Centrifugation: A Pratical Approach. Rickwood D. ed., Oxford University Press, 1st ed 1993

- Bioenergetics. D.G. Nicholls & S. Ferguson, Academic Press, 3rd ed. 2002

- Handbook of Laboratory Animal Science–Essential Principles and Practices. Hau J.,Van Hoosier, G.L. ed. CRC Press, 2nd ed. 2002

- Cell physiology source book: essentials of membrane biophysics. N. Sperelakis (ed.),  Academic Press, 4th ed., 2012

- The The physiology of excitable cells. D.J. Aidley, Cambridge University Press, 4th ed., 1998

- Lehninger principles of biochemistry. D.L. Nelson & M.M. Cox, W.H. Freeman, 6th ed., 2013

São ainda recomendados diversos artigos de investigação, específicos para cada tema em estudo.

Specific scientific articles are also recommended for each laboratory experiment.