Laboratórios de Biologia Molecular

Conhecimentos de Base Recomendados

Fundamentos de Biologia Molecular e frequência prévia de unidade curricular laboratorial.

Métodos de Ensino

Exposição teórica dos items a abordar em cada aula seguida de realização do trabalho prático. No trabalho prático os alunos estão divididos por grupos, desenvolvendo projetos com técnicas básicas em Biologia Molecular, segundo um protocolo experimental. Ao longo da execução do protocolo é dicutida a metodologia utilizada. No final analisam-se e discutem-se os resultados. Execução de um projeto teórico-prático onde se aplicam e consolidam todos os conhecimentos adquiridos ao longo das várias aulas práticas, resultando no desenvolvimento de uma proposta de projeto experimental, com apresentação oral (em grupo) e discussão.

Resultados de Aprendizagem

O objetivo desta unidade curricular é a aquisição de conhecimentos técnicos e práticos sobre as principais tecnologias de biologia molecular e conhecimentos básicos em bioinformática do ponto de vista do utilizador. Para isso os estudantes deverão desenvolver competências e adquirir conhecimentos em técnicas básicas como clonagem de DNA, análise de restrição, expressão e purificação de proteína recombinante em sistemas heterólogos, análise da expressão genética com recurso à técnica de PCR quantitativo em tempo real. Numa segunda etapa pretende-se que os estudantes desenvolvam uma proposta de projeto experimental aplicando os conhecimentos de biologia molecular.

Estágio(s)

Não

Programa

Clonagem de DNA: Ligação do produto amplificado por PCR a um vetor de clonagem; Preparação de células competentes e transformação de ligação; Seleção de clones recombinantes - princípio de inativação por inserção; Isolamento de DNA plasmídico; Análise de restrição de DNA plasmídico.
Expressão e purificação de proteína recombinante expressa: Purificação de uma proteína de fusão; Análise do processo de expressão e purificação em gel de poliacrilamida em condições desnaturantes (SDS-PAGE) e Western blot.

Princípios básicos de cultura celular; Silenciamento genético in vitro: métodos comuns, suas aplicações e limitações. Extração e quantificação de mRNA e síntese de cDNA. Análise da expressão genética com recurso à técnica de PCR quantitativo em tempo real. Seleção e desenho de iniciadores de PCR. Princípios básicos de utilização de bases de dados como BLAST. Análise de curvas de fusão.

Docente(s) responsável(eis)

Anabela Pinto Rolo

Métodos de Avaliação

Avaliação
Proposta de trabalho de clonagem: 15.0%
Projecto: 35.0%
Frequência: 50.0%

Bibliografia

Alberts, B., Heald, R., Johnson, A. D., Morgan, D., Roberts, K., & Walter, P. (2022). Molecular Biology of the Cell (7th ed.). W. W. Norton & Company

Methods in Molecular Biology | Book series home, Springer (2025) Electronic ISSN 1940-6029

Current Protocols in Molecular Biology | Wiley Interscience (2025)

JOVE - Video Platform for Research, Teaching and Education

M.R. Green and J. Sambrook (2012) Molecular Cloning: A laboratory Manual, 4th ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press; New York