Laboratórios de Biologia Molecular

Conhecimentos de Base Recomendados

O aluno deve já ter tido aprovação à disciplina de Biologia Molecular ou estar a frequentar esta disciplina.

Resultados de Aprendizagem

O objectivo desta unidade curricular é a aquisição de conhecimentos técnicos e práticos sobre as principais tecnologias de biologia molecular e conhecimentos básicos em bionforática do ponto de vista do utilizador. Para isso os alunos deverão desenvolver competências e adquirir conhecimentos de técnicas básicas como PCR, genotipagem, clonagem de DNA, análise de restrição, expressão e purificação de protéina recombinate em sistemas heterólogos. Mais tarde, pretende-se que os alunos desenvolvam competências na área da bionformática. A aquisição de conhecimentos e princípios básicos de diferentes aplicações de bioinformática será feita usando a informação e as ferramentas disponíveis na internet.

Estágio(s)

Não

Programa

Estudo da presença da sequência Alu (short repetitive interspersed element) no cromossoma 16 e genotipagem.

Amplificação de um fragmento de DNA por PCR e análise do produto amplificado em gel de agarose.

Clonagem de DNA: Ligação do produto amplificado por PCR a um vector de clonagem; Preparação de células competentes por tratamento com cloreto de cálcio e transformação de ligação por choque térmico; Selecção de clones recombinantes – princípio de inactivação por inserção (selecção lac); Isolamento de DNA plasmídico por método de lise alcalina; Análise de restrição de DNA plasmídico.

Expressão e purificação de proteína recombinante expressa em E. coli: Purificação de uma proteína de fusão com a Glutationa S-transferase; Análise do processo de expressão e purificação em gel de poliacrilamida em condições desnaturantes (SDS-PAGE) e Western blot.

Bioinformática: aplicações e desafios actuais. Princípios básicos de utilização de bases de dados como BLAST, PFAM, InterPro, entre outras.

Docente(s) responsável(eis)

Anabela Pinto Rolo

Métodos de Avaliação

Avaliação
Projecto: 30.0%
Dois relatórios das aulas práticas: 30.0%
Exame: 40.0%

Bibliografia

-Gene Cloning and DNA Analysis, T.A. Brown, 2006, 5ª Edição, WileyBlackwell; ISBN: 1405111216.

-Current Protocols in Molecular Biology, Ausubel et al., John Wiley & Sons, Inc.

-Molecular Cloning: A laboratory Manual, Sambrock and Russel, Cold Spring HArbor laboratory Press.

-Molecular Cell Biology, Harvey Lodish, Arnold Berk, Chris A. Kaiser, Monty Krieger, Matthew P. Scott, Anthony Bretscher, Hidde Ploegh, Paul T. Matsudaira, 2007, 6ª Edição, W.H. Freeman and Company.